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| Anno Accademico: 2014-2015 |
| Iscrizione on line | Appelli d'esame | Avvisi |
| Titolatura | Biochimica applicata |
| CDS | Farmacia (DM270) |
| Docenti | Gino Giannaccini |
| Anno(i) di frequenza | Terzo |
| Tipo di insegnamento | Corso/Laboratorio |
| Codici/crediti |
Modulo A: cfu:4 Modulo B: cfu:2 Modulo completo:030EE cfu:6 |
| Settore scientifico - disciplinare | BIO/10 |
| Note | attività didattica frontale: 28 ore - laboratorio: 30 ore (per 2 turni) |
| Periodo lezioni | Annuale |
| Commissione: Membri | Lucacchini,Martini,Betti,Trincavelli,Costa |
| Commissione: Supplenti | Palego,Giusti,Rossi,Da Pozzo |
| Titolo - modulo A o unico | Metodi di coltura delle cellule Citofluorimetro Metodi di rottura delle cellule: Omogenizzazione, French Press, sonicazione, metodi meccanici,metodi enzimatici e con l’uso di abrasivi. Importanza e contenuti dei principali tamponi di estrazione. Tecniche di centrifugazione: Principi di base della sedimentazione, tipi di rotori (angolo fisso , alloggiamento versticale, bracci oscillanti, elutriatori). Tipi di centruifughe. Tecniche di sedimentazione (differenziale, in gradiente di densita’, per elutriazione). Materiali per gradienti. Ultracentrifughe: generalita’ di utilizzo. Purificazione e caratterizzazione delle proteine: Proprieta’ ioniche degli aminoacidi e delle proteine native e in soluzione. Punto isoelettrico. Stabilita’ (termica e in presenza di pH variabile). Criteri di solubilita’ e loro utilizzo per la purificazione delle proteine (frazionamento con sali, solventi organici, PEG, precipitazione isoelettrica). Utilizzo della metodi di quantificazione delle proteine in soluzione: spettrofotometria ottica e all’ultravioletto per la determinazione della concentrazione di campioni proteici, colorazione di Bradford, Lowry. Tecniche elettroforetiche e di trasferimento su carta, immunoblotting analysis: Principi generali dell’elettroforesi su matrici solide. Elettroforesi su Gel di agarosio e poliacrilammide (PAGE). Matrici per elettroforesi e loro utilizzo. Elettroforesi su SDS-PAGE. Tipi di tamponi utilizzati per l’analisi PAGE : continui e discontinui. Isoelettrofocusing (IEF) e gel bidimensionali: criteri generali. Generalita’ sull’uso di gel bidimensionali e il loro utilizzo in proteomica e spettrometria di massa (MALDI-TOF). Western blotting. Tipi di membrane utilizzate e criteri di utilizzo. Rivelazione delle proteine tramite colorazione su gel :Comassie brilliant Blue, Silver staining. Rivelazione delle proteine: tramite colorazione su membrana (Ponceau S) o con anticorpi coniugati ad enzimi o fluorocromi (immunodetection) Tecniche cromatografiche: Principi generali di cromatografia (Risoluzione, efficienza, capacità), cromatogramma. Cromatografia su colonna (setaccio molecolare, a scambio ionico, affinita’, idrofobicita’, HPLC, FPLC): generalità d’utilizzo. Radio-isotopi: Naturra della radioattivìtà: Tipi di radioattività. Decadimento. Unità di radioattività. Sicurezza. Rivelamento e misura della radioattività: Tubi di Geiger-Muller. Contatori a scintillazione liquida. Autoradiografia. Uso in biochimica dei radioisotopi. Traccianti. Produzione di anticorpi: Anticorpi policlonali. Anticorpi monoclonali. Tecniche di produzione degli anticorpi. |
| Argomento: Modulo A | ESERCITAZIONI PRATICHE: 1) Frazionamento subcellulare: isolamento della frazione nucleare e mitocondriale da omogenato di tessuto muscolare bovino. 2) Determinazione quantitativa delle proteine totali: metodo del biureto. 3) Saggi di attività enzimatica: ; dosaggio dell’enzima lattico deidrogenasi in sovranatante di tessuto muscolare bovino. 4) Saggi di attività enzimatica: cinetica enzimatica dell’adenosina deaminasi determinazione dei parametri Km e Vmax; 5) Saggi di attività enzimatica: cinetica enzimatica dell’adenosina deaminasi determinazione della dipendenza dal pH. 6) Separazione elettroforetica di proteine su gel di poliacrilammide in condizioni denaturanti. |
| Testi: Modulo A | Testi consigliati A.L. Lehninger: BIOCHIMICA. Zanichelli II A.L. Lehninger, D.L. Nelson, M.M. Cox: PRINCIPI DI BIOCHIMICA. Zanichelli B. Mondovì : BIOCHIMICA APPLICATA. Idelson Wilson K, Goulding K. METODOLOGIE BIOCHIMICHE Raffaello Cortina Editore. |
| Prossimi appelli | Da settembre 2014 le iscrizioni si raccolgono dal portale esami di ateneo |
Ultimo aggiornamento: 9/6/2014
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